反相色譜法用的乙腈與甲醇的區(qū)別

1、首先，乙腈價(jià)格高
    乙腈，特別是HPLC級(jí)的價(jià)格很高，但是，文獻(xiàn)或LC廠家所示的條件，多用乙腈，這是為什么呢？現(xiàn)就此談?wù)劇?/p>

2、吸光度。
    乙腈HPLC級(jí)的小。乙腈和甲醇的市銷HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí)的吸收光譜中，乙腈HPLC吸收最小（特別是在短波長(zhǎng)上小）。所謂HPLC級(jí)是除去具有吸收UV的雜質(zhì)，在規(guī)定的波長(zhǎng)上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi)。在UV檢測(cè)時(shí)，產(chǎn)生的噪聲小，因此在進(jìn)行UV短波長(zhǎng)上的高靈敏度分析時(shí)乙腈HPLC級(jí)最適宜。另外，在UV檢測(cè)中的梯度基線上也是乙腈HPLC級(jí)產(chǎn)生鬼峰少，雖然，其他與水相溶性高的有機(jī)溶劑有各種各樣，但很難能找到比乙腈HPLC級(jí)吸收更小的。另外，甲醇的HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí)，雖然所得的光譜相差不大，但是優(yōu)級(jí)不能保證吸光度，有可能產(chǎn)生偏差，價(jià)格也相差不大，所以盡量使用HPLC級(jí)。

3、壓力。
    乙腈低，柱內(nèi)承受的壓力，根據(jù)有機(jī)溶劑的種類或混合比率的不同而異，水/乙腈，水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合，壓力增高，而乙腈同樣與水混合且并不如此。所以，乙腈一方，在同樣的流速下不在柱內(nèi)加上多余的壓力。從上述兩項(xiàng)，可以確認(rèn)使用乙腈的意義，那么，甲醇除了價(jià)格以外，還有沒(méi)有其化優(yōu)點(diǎn)呢?

4、洗脫能力。
    一般而言，乙腈較強(qiáng)。乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時(shí)，一般情況下，乙腈的洗脫能力強(qiáng)。特別是混合比率低時(shí)，從咖啡因和苯酚的洗脫來(lái)看，獲得同樣的保留時(shí)間，乙腈的比率，只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面，有機(jī)溶劑100%或與此極接近時(shí)，從胡蘿卜素和膽甾醇來(lái)看，常常都是甲醇的洗脫能力強(qiáng)。混合比在50比1等較為特殊時(shí)，調(diào)制的誤差大，影響保留時(shí)間，或平衡化的時(shí)間長(zhǎng)，乙腈遇到這種情況時(shí)，用甲醇的10比1混合代替乙腈，這樣操作方便些。溶劑受溫度影響時(shí)，不采用容器定量，而采用重量的方法(考慮比重)，可使混合比的誤差減小。

5、分離(洗脫)的選擇性。
    兩者的差異，乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同。由于有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性，乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致。因此，在用乙腈類不能獲得分離的選擇性，就試用甲醇類看看。

6、峰形。
    用時(shí)出現(xiàn)差異。像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等，用乙腈類時(shí)拖尾大，用甲醇類可抑制。可是，一般情況下，聚合物類反相柱，與硅膠柱相比，更具有峰形寬的傾向，特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等時(shí)常見(jiàn)。這在流動(dòng)相是甲醇時(shí)非常顯著，而用乙腈時(shí)不明顯。為此，用聚合物類反相用柱時(shí)建議采用后者(乙腈類)，這是因?yàn)橐译媸鼓z膨潤(rùn)。

7、流動(dòng)相的脫氣，乙腈類要注意。
    混合溶劑的置制，不說(shuō)在LC裝置內(nèi)，只談?lì)A(yù)先在流動(dòng)相瓶?jī)?nèi)進(jìn)行時(shí)，(等濃度系統(tǒng))。甲醇與水混合時(shí)發(fā)熱，多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?脫氣容易)。而乙腈由于吸熱冷卻，隨著慢慢回到室溫，產(chǎn)生氣泡，所以要考慮脫氣(加溫?cái)嚢瑁^(guò)濾膜，He脫氣等)。

8、結(jié)論
    以上反相色譜法流動(dòng)相常用的乙腈和甲醇進(jìn)行了比較。粗略地講是，使用乙腈HPLC級(jí)最好，在選擇性，峰形差時(shí)試用甲醇HPLC，但根據(jù)各種不用性質(zhì)設(shè)計(jì)分析條件也是必要的。