紫外分光光度法測定紫云英蜜中總酚的含量

紫外分光光度法測定紫云英蜜中總酚的含量
 
目的：建立紫云英蜜中總酚含量測定方法。方法：采用Folin酚法，樣品經(jīng)福林試劑顯色反應(yīng)后，紫外可見分光光度計(jì)測定其總酚含量。結(jié)果：總酚在2.03～8.04μg·mL-1內(nèi)線性良好，r=0.9997，且平均回收率為102.42%，RSD=2.64%(n=5)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確，簡便，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可有效地控制紫云英蜜的質(zhì)量。
紫云英蜜又名紅花草蜜或草子蜜，具有大自然清新宜人的草香味，甜而不膩，鮮潔清甜，色澤為淺琥珀色。富含多糖、多酚、氨基酸、維生素、微量元素等多種營養(yǎng)成分，長期飲用可補(bǔ)氣血，健脾胃，增強(qiáng)抗病能力，強(qiáng)身健體。且其中的多酚酸具有抗病原微生物、抗炎癥、抗變態(tài)反應(yīng)、抗心血管疾病和抗氧化等作用［1，2］。為了控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們采用Folin酚法對貴州不同產(chǎn)地的紫云英蜜中總多酚含量進(jìn)行了研究。
1儀器與試藥
1.1儀器
紫外可見分光光度計(jì)(本昂儀器);超聲波清洗儀(本昂儀器);恒溫水浴鍋(本昂儀器)。
1.2試藥
原兒茶酸對照品(批號：110809200503)；鎢酸鈉，磷鉬酸，85%磷酸，N a2CO3，以上試劑均為分析純；水為蒸餾水；
1.3福林試劑的配制［3］：
稱取鎢酸鈉40g，磷鉬酸8g和85%磷酸20mL，溶于300ml蒸餾水，煮沸加熱回流2h，冷卻，稀釋至400mL，置于棕色瓶中保存。
1.4Na2CO3溶液的配制
稱取15gNa2CO3，溶于200mL蒸餾水中，即為75g·L-1Na2CO3溶液。
2方法與結(jié)果
2.1對照品溶液的制備
原兒茶酸對照品的配制：稱取原兒茶酸對照品15.80mg于50mL容量瓶中，蒸餾水溶解并定容，搖勻，備用，濃度為316μg·mL-1。
2.2供試品溶液的制備
取同一批樣品，精密稱定，置于50mL容量瓶中，超聲使溶，過濾，取20mL續(xù)濾液定容成50mL，搖勻，備用。
2.3測定方法
精密吸取適量樣品溶液1mL于10mL帶塞離心管中，加入2.5mL福林試劑，放置5min，再精密加入Na2CO3溶液2mL，50℃水浴保持5min，再取出室溫放置2h，于760nm左右測定吸光度值。
2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
從原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液中分別吸取1，1.5，2，2.5，3，3.5mL于25mL容量瓶中，蒸餾水稀釋定容，搖勻，濃度分別為12.64μg·mL-1，18.96μg·mL-1，25.28μg·mL-1，31.60μg·mL-1，37.92μg·mL-1，44.24μg·mL-1，分別從中精密吸取1mL，按2.3測定方法反應(yīng)，測定吸光度值。以終濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y=0.0932X-0.0315，r=0.9997。結(jié)果表明總酚在12.64μg·mL-1～44.24μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。
2.5精密度試驗(yàn)
取同一份對照品按上述反應(yīng)后連續(xù)測定5次，吸光度值RSD=0.386%。結(jié)果表明儀器精密度良好。
2.6樣品吸光度值穩(wěn)定性試驗(yàn)
按2.2供試品溶液制備方法制備樣品液，并按2.3測定方法反應(yīng)后，每隔5min測定一次，觀察吸光度值變化，結(jié)果1h內(nèi)的吸光度值RSD=1.42%，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明樣品顯色后在1h內(nèi)較穩(wěn)定。
2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)
取同一批樣品，平行5份，精密稱定，按供試品溶液法制備，并按2.3測定法反應(yīng)。結(jié)果表明，樣品的平均含量為2.154mg·g-1，RSD=3.43%。結(jié)果表明方法重現(xiàn)性良好。
2.8加樣回收率試驗(yàn)
取同一批樣品，精密稱定，精密加入337μg·mL-1原兒茶酸對照品2mL，按供試品溶液法操作，并按2.3測定樣品中總酚的含量，結(jié)果表明，其回收率為102.42%，RSD=2.64%，數(shù)據(jù)見表1。表1總酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(、略)
2.9樣品含量測定
分別精密稱取貴州不同產(chǎn)地的樣品，每批平行取5份，按2.3測定方法操作，測定每批樣品中總酚平均含量。結(jié)果見表2。表2不同批次樣品總酚含量(略)
3討論
植物多酚的測定方法有多種［3，4］，曾考察普魯士藍(lán)法［5］、重氮比色法［6］等，均因?yàn)榉椒@色不穩(wěn)定或方法步驟復(fù)雜而未采用。而Folin酚法實(shí)驗(yàn)操作較簡單，且結(jié)果穩(wěn)定可靠，故選用該方法作為紫云英蜜中總酚含量測定方法。