摘要
島津Prominence LC-20A高效液相色譜儀系統(tǒng)
內(nèi)容
2007年，國內(nèi)外發(fā)生多起寵物因食用添加了三聚氰胺的寵物食品而致死的例子，大量相關(guān)產(chǎn)品被召回。2008年9月，國內(nèi)發(fā)生奶粉中三聚氰胺導(dǎo)致嬰幼兒腎結(jié)石和腎功能衰竭甚至死亡的惡性事件。
目前對于三聚氰胺的檢測，最常規(guī)的方法為LC方法。但由于該化合物含有三個有機氮基團，極性強，在普通C18反相柱上難以保留，無法達到分離效果。文獻報導(dǎo)的HPLC方法基本都須加入離子對試劑以增加三聚氰胺的保留，但辛烷磺酸鈉等離子對試劑恰恰限制了LC-MS的應(yīng)用。本文采用新型的SCX-C18混合填料色譜柱測定三聚氰胺，該柱內(nèi)填充的是均勻混合的SCX和普通C18填料顆粒，兼具離子交換和反相分離的特點，檢測中不需加入離子對試劑，還可應(yīng)用與LCsolution聯(lián)機，操作簡便，靈敏度高。
儀器概況
本實驗使用島津Prominence LC-20A高效液相色譜儀系統(tǒng)。LC-20A是島津制作所投入整體力量開發(fā)的新一代高效液相色譜儀，具有以下特點：優(yōu)越的基本性能，輕松滿足客戶對儀器嚴格的要求；全自動化操作，實現(xiàn)了分析的高效率；高度對應(yīng)網(wǎng)絡(luò)要求的綜合管理系統(tǒng)，改善分析工作環(huán)境。
本次實驗所用儀器的具體配置為LC-20AD輸液泵，DGU-20A3在線脫氣，SIL-20A自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱，SPD-20A紫外可見檢測器，CBM-20A控制器和LCsolution色譜工作站。
分析方法色譜柱：CAPcell Pak CR(1:4) 4.6×150mm 5μm
檢測波長：243nm
流動相：15mM醋酸銨緩沖液(pH3.0):乙腈=7:3
流速：1.2mL/min
柱溫：30℃
進樣量：10μL
洗脫方式：等度洗脫。
樣品前處理方法 取奶粉樣品0.5g，準確加入5mL三氯乙酸溶液和0.2mL乙酸鉛溶液，搖勻，超聲提取20min。轉(zhuǎn)入離心管，在10000r/min離心機上離心5min，取上清液, 0.45μm濾膜過濾，上機測定。
分析結(jié)果
1.保留時間與峰形
圖1為本方法檢測三聚氰胺標樣的典型色譜圖（樣品濃度為5ug/mL）
圖1 三聚氰胺標樣圖譜
由圖1可見，本方法所測三聚氰胺保留時間為9.38min，峰形尖銳，對稱性好。
2.精密度
取濃度為5μg/mL三聚氰胺標樣，連續(xù)進樣5次，結(jié)果如表1所示。
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編號
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保留時間(min)
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峰面積(μV.S)
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1
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9.378
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113178
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|
2
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9.388
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112902
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3
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9.397
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112677
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4
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9.397
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112874
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5
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9.409
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112909
|
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Average
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9.394
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112908
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%RSD
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0.12
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0.16
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表1 保留時間與峰面積的重現(xiàn)性
由表1結(jié)果可見，本方法測定三聚氰胺具有良好的精密度和重現(xiàn)性。
3.標準曲線 取標準品，用緩沖液稀釋成濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的標準工作液，分別進樣，得到校準曲線(見圖2)。
圖2 校準曲線
結(jié)果表明，該方法線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9999。
4.加標回收率 取奶粉空白樣品，加入不同濃度的三聚氰胺標準工作液，使奶粉中最終含量分別為0.5mg/kg、5mg/kg和50mg/kg，結(jié)果如下：
圖3 空白奶粉
圖4 空白奶粉添加0.5mg/kg三聚氰胺
圖5 空白奶粉添加5mg/kg三聚氰胺
圖6 空白奶粉添加50mg/kg三聚氰胺
加樣回收率結(jié)果如表2所示。
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加樣量(mg/kg)
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計算結(jié)果(mg/kg)
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回收率
%
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平均回收率%
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0.5
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0.55
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109.3
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115
|
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0.60
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120
|
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5.0
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4.56
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91.2
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92.9
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4.72
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94.5
|
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50
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48.6
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97.2
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97.8
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49.2
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98.4
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表2 3個不同濃度樣品回收率
5.檢測限和定量限
用軟件計算出奶粉中三聚氰胺含量檢測限為0.43mg/kg ，定量限為1.31mg/kg。
6.實際樣品分析結(jié)果 按本方法測定某品牌的奶粉，得到的圖譜如圖7所示。兩份重復(fù)樣品中測得三聚氰胺的濃度分別為19.7和19.8mg/kg，重現(xiàn)性良好。(用反相離子對色譜法測得的兩次結(jié)果分別為19.1和19.2 mg/kg)
圖7 某品牌陽性樣品檢測結(jié)果
結(jié)論
本方法定量限為1.31mg/kg，具有操作簡單方便，靈敏度較高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點。流動相中不用加入離子對試劑，為LCMS的分析提供了可能。且樣品經(jīng)提取后可不用經(jīng)過SPE步驟即可進樣，大大簡化了分析過程，節(jié)省了分析成本。本方法適合奶粉中三聚氰胺含量的測定，特別是大批量樣品的低成本快速檢測。
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