新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。

   卡套柱的安裝（不加預(yù)柱）

     1．將卡套架套入柱芯

     2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套（見左圖）

     3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片

     4．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊

     5．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端

     6．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手

  注意：使用卡套柱時(shí)，兩端的卡套應(yīng)時(shí)刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時(shí)候都不能將卡套取下來，否則會(huì)造成填料的流失。

     卡套柱的安裝（加預(yù)柱）

    1．將卡套架套入柱芯

    2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見左圖）

    3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片

    4．將"子彈頭"預(yù)柱放入卡套片內(nèi)

    5．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊

    6．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端

    7．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手

更換色譜柱濾網(wǎng)和玻璃棉過濾片（同時(shí)可以修補(bǔ)色譜柱）

    注意：在取出反相柱芯的濾網(wǎng)和玻璃片之前，應(yīng)該將色譜柱充分用水和甲醇/乙腈沖洗，而且修補(bǔ)工具的頭部也應(yīng)該蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出濾網(wǎng)和玻璃棉濾片時(shí)帶出柱子內(nèi)的填料。

     1．將修補(bǔ)工具中的2套入柱芯的頂端

     2．將修補(bǔ)工具中的3輕輕地旋入已套著2的柱芯中，并順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)到旋緊

     3．一手握柱芯，另一只手輕輕地向外拉3，取出柱芯頂端的濾網(wǎng)

     4．用一個(gè)小鏟子輕輕地取出濾網(wǎng)下面的玻璃棉以及被污染的填料

     5．將新的填料用甲醇潤(rùn)濕，然后填入挖去的部位，壓平

     6．照（左圖）裝上新的玻璃棉濾網(wǎng)，并用修補(bǔ)工具中的4將玻璃棉壓入柱芯頂端

     7．柱芯頂端套上2，然后參照（左圖）將濾網(wǎng)放入

     8．壓緊，然后取下2，再用4將濾網(wǎng)的邊緣壓平

     平衡色譜柱 　反相色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過程中可能會(huì)干掉，因此在用流動(dòng)相分析樣品之前，應(yīng)使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"。

     硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡

      如何平衡色譜柱？

平衡過程中，將流速緩慢地提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來平衡）

      色譜柱的再生 　　進(jìn)行色譜柱再生時(shí)，應(yīng)使用一個(gè)謙價(jià)的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。

      表1　建議用來沖洗的溶劑體積

      色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積

          125-4 1.6ml 30ml

          250-4 3.2ml 60ml

          250-10 -20ml 400ml

 請(qǐng)根據(jù)下表選擇您的再生方法：

     極性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色譜填料）的再生：

     正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

     非極性固定相（如反相色譜填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：

     水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水

     0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱

 注意：

     在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。

     **如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

色譜柱的維護(hù)

     1．使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）

     2．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍

     3．避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化

     4．流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

     5．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中

     6．壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)