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  • 氨基色譜柱的使用與保養(yǎng)

    發(fā)布于 2012/05/31閱讀(1636)來(lái)源 zxj標(biāo)簽 氨基色譜柱

    摘要

    氨基色譜柱,全稱氨丙基鍵合硅膠色譜柱,在HPLC中既可以作為反相色譜柱,又可以作為正相色譜柱

    內(nèi)容

    氨基色譜柱的使用與保養(yǎng)
     
    氨基色譜柱,全稱氨丙基鍵合硅膠色譜柱,在HPLC中既可以作為反相色譜柱,又可以作為正相色譜柱.使用者在進(jìn)行正反相轉(zhuǎn)換操作過程中一定要注意以下幾項(xiàng):

    對(duì)于新購(gòu)買到的柱子,首先請(qǐng)注意打開分析測(cè)試說(shuō)明書,了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動(dòng)相極性不同不會(huì)互溶,請(qǐng)先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會(huì)導(dǎo)致柱壓很高,適當(dāng)調(diào)低流速即可。如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動(dòng)相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
    柱效檢測(cè):
        我用于判斷一個(gè)用戶是否有經(jīng)驗(yàn)的指標(biāo)之一,是用戶是否習(xí)慣配制一些柱效檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液。說(shuō)到柱效檢測(cè),我可以向大家提供一個(gè)方法,而且很通用,你也可以用同樣的標(biāo)準(zhǔn)溶液和流動(dòng)相來(lái)檢測(cè)硅膠柱和氰基柱。
    流動(dòng)相:
    10%乙酸乙酯+90%正己烷 流速1.0
    標(biāo)準(zhǔn)溶液:
    乙苯(如乙苯找不動(dòng)就用甲苯代替唄)+苯甲酸甲酯
    檢測(cè)波長(zhǎng)254nm
        這個(gè)方法特別適用于新購(gòu)柱子(新購(gòu)柱子往往保存在正相溶劑中)時(shí)即進(jìn)行檢測(cè),如有問題,可及時(shí)與供應(yīng)商溝通。也適合在柱子在準(zhǔn)備放置相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間之前進(jìn)行充分清洗后進(jìn)行檢測(cè)作為記錄留檔。在平常的使用過程中,如果分析物是固定重復(fù)的,我們當(dāng)然可以從對(duì)分析物的分離分析情況來(lái)作出判斷;但如果分析物和分析條件不同時(shí),定期檢測(cè)柱效可以避免柱效下降導(dǎo)致分離不佳再分析查找原因這樣浪費(fèi)人力物力的過程。不過特別要注意的是,當(dāng)氨基柱(或氰基柱)在反相條件中使用時(shí),如用該條件檢測(cè),請(qǐng)注意流動(dòng)相的換相過渡問題。
    氨基柱的使用:
        需要注意的是,氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團(tuán)C18,C8要容易水解,所以首先要做好其使用壽命稍遜的心理準(zhǔn)備,特別是當(dāng)你的使用條件是反相條件下時(shí)。
        反相條件下使用時(shí),要特別注意控制PH值范圍,PH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。所以,在使用后以及準(zhǔn)備長(zhǎng)時(shí)間放置該柱時(shí),必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機(jī)溶劑中是很好的保養(yǎng)措施。
        有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)如果汁的分析時(shí)(分析其中的糖份),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。這時(shí),Kromasil專家所給的建議是:用5-10倍的柱體積的含0.5- 1.0%NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。
    氨基柱的清洗
        簡(jiǎn)單說(shuō)起來(lái),正相條件下使用的氨基柱你就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱你就參照C18的清洗方法。
    平時(shí)在正相條件下使用:
        首先用50倍柱體積的異丙醇清洗,因異丙醇粘度較大可適當(dāng)放低流速;之后,用50倍的甲醇清洗;之后,用異丙醇過渡回到平常使用的正相流動(dòng)相,即可。
    平時(shí)在反相條件下使用:
        緩沖鹽應(yīng)及時(shí)沖洗,以及不能直接用純甲醇沖洗緩沖鹽等,屬常識(shí)就不作特別交待了。
    用50倍純甲醇沖洗;之后,用異丙醇過渡后,用二氯甲烷沖洗色譜柱;之后,再用異丙醇過渡回來(lái)到甲醇條件下。
    這些清洗方法,主要是針對(duì)當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時(shí)的處理方法,色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等
    LUNA氨基柱的使用方法
    1.氨基柱既可以正相使用,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中,例如LUNA
    氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中。
    2. 正相使用
    2.1
        新柱子可直接用流動(dòng)相。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,再根據(jù)流動(dòng)相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速?zèng)_10倍柱體積,最后換成流動(dòng)相。
    2.2
        正相使用時(shí),不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動(dòng)相要徹底脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物2.3 任何時(shí)候更換流動(dòng)相時(shí)都要確保新流動(dòng)相與柱子原保存液可互溶。
    3 反相使用
    3.1
        先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子。
    3.2
        以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0),立即用水(
    0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動(dòng)相。
    3.3
        配制流動(dòng)相時(shí),應(yīng)各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。
    3.4
        反相條件下使用時(shí),要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。最理想的pH范圍在pH
    3.0-7.0
    3.5
        如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動(dòng)相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
    3.6
        有一種情況是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。
    4
        色譜柱的沖洗:簡(jiǎn)單說(shuō)起來(lái),正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱就參照C18的清洗方法。
    5 色譜柱的保存
    5.1
        正相使用時(shí),將柱子沖洗干凈后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。
    5.2
        反相使用時(shí),如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;長(zhǎng)期不用時(shí)需將甲醇依次用異丙醇、氯仿

     
     

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